以下是胎牛血清使用中常见问题及解决方法的系统性总结，依据实验室实践与专业文献整理：

一、储存与冻融问题

正确储存条件

长期储存需在 -20℃以下，避免反复冻融。

短期存放（≤1个月）可置于 2-8℃，超期易导致蛋白质凝集形成沉淀。

冻融操作规范

解冻步骤：

先移入 2-8℃冰箱部分溶解，再室温完全融解；

或 37℃水浴边加热边轻柔摇晃均匀，避免局部过热。

分装建议：未用完血清应无菌分装至离心管，按需取用。

二、沉淀与絮状物处理

沉淀成因

纤维蛋白/脂蛋白：正常成分，非污染或变质。

磷酸钙结晶：呈现"小黑点"，易误认为微生物污染。

不当操作：反复冻融、长时间存于2-8℃或37℃。

去除方法

低速离心：400g离心1-2分钟，取上清使用（禁止过滤，避免堵塞滤膜）。

溶解尝试：37℃水浴轻摇，部分沉淀可重新溶解。

三、血清选择与真伪规避

品牌选择原则

娇贵细胞（如干细胞）建议选用特级胎牛血清（如Ausbian WS500T系列），普通细胞国产血清可满足。

警惕代理商假货：优先选择厂家直供或国内办事处渠道。

批次稳定性管理

锁定单一批次（800-2000L产量），确保2年内实验一致性。

新批次使用前务必索取试用装验证细胞适应性。

四、热灭活的争议与操作

必要性评估

绝大多数细胞无需热灭活（56℃ 30分钟）。该过程会破坏生长因子，增加沉淀，且可能误判为污染。

仅免疫学实验（需灭活补体）时采用。

规范操作（必要时）

严格控温：56℃水浴，全程摇晃均匀，避免局部过热。

灭活后立即分装冷冻，减少沉淀生成。

五、关键操作禁忌

温度骤变：禁止从-20℃直接转入37℃解冻，温差导致蛋白变性。

长时间高温暴露：血清在37℃放置>2小时会浑浊，活性成分降解。

过度震荡：解冻时剧烈摇晃产生气泡，加速蛋白氧化。

六、特殊问题应对

γ-辐照血清：不影响理化性能，但可能轻微增加沉淀3。

细胞治疗专用血清：选择低内毒素（≤3EU/ml）、高克隆效率（≥85%）型号（如Ausbian WS500T红点系列）。

申报支持需求：索取完整检测报告（内毒素、无菌、支原体等）。

以上方案综合实验室高频问题，兼顾安全性与成本效益。建议建立专属血清管理日志，记录批号、分装日期及细胞生长反馈，长期优化培养体系稳定性。