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血清瓶底那层薄薄的沉淀,不是杂质,是你没提前摇匀就分装的蛋白层

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每次从-20℃冰箱里拿出一瓶冻得结结实实的胎牛血清,很多实验人为了赶进度,会直接把它丢进37℃的水浴锅里“暴力”解冻。看着冰块迅速化开,心里觉得效率挺高。可等血清分装到离心管里,静置一会儿,瓶底总会留下一层薄薄的、甚至有点像絮状的沉淀。这时候,不少人心里就开始犯嘀咕:这血清是不是变质了?是不是有杂质?要不要拿滤膜过滤一下?

先别急着扔,也别急着过滤。这层薄薄的沉淀,绝大多数情况下不是杂质,也不是污染,而是你解冻时没提前摇匀,导致蛋白析出形成的“蛋白层”。

血清这东西,成分极其复杂,里面藏着成百上千种蛋白、生长因子和脂蛋白。当它被冻成冰疙瘩时,这些物质在冰晶的挤压下,分布其实是非常不均匀的。如果你直接把它扔进37℃的温水里,外面的血清瞬间化成了水,里面的冰块还没动静。这种剧烈的温差和融化速度差,会让局部区域的蛋白浓度瞬间飙升。脂蛋白和纤维蛋白受不了这种环境突变,就会抱团析出,变成你肉眼看到的絮状物。

说白了,这是物理现象,不是生化污染。

很多新手一看到沉淀就慌了神,第一反应是拿0.22μm的滤膜去过滤。千万别这么干。血清里的絮状物粘性极大,用滤膜过滤不仅会瞬间堵死滤头,还会把血清里宝贵的生长因子和营养物质一起“截胡”掉。这简直是花钱买罪受。

正确的做法其实特别简单。如果你非要追求完美,觉得瓶底有东西看着心烦,那就把血清倒进无菌离心管里,放在离心机里,用400到500g的低速离心个两三分钟。沉淀物会老老实实地贴在管底,你轻轻把上清液吸出来,剩下的那层“蛋白层”直接扔掉就行。如果沉淀不多,你甚至不用离心,加培养基的时候避开瓶底,别把沉淀吸进去,完全不影响细胞生长。

当然,最好的办法是从源头掐断这个问题。下次解冻血清,别再用37℃水浴了。提前一天把它从-20℃拿出来,放进4℃冰箱里过夜。在解冻的过程中,每隔两三个小时,拿出来轻轻颠倒摇匀。让血清在低温下缓慢、均匀地化开,让蛋白有足够的时间重新溶解到液体里。等它彻底化开,再在室温下放一会儿,摇匀后分装。这样处理出来的血清,清澈透亮,瓶底干干净净。

还有一点,很多人喜欢给血清做热灭活,56℃水浴半小时。除非你的细胞对补体特别敏感,否则真没必要。高温会让血清里的蛋白大量变性,灭活完的血清,瓶底的沉淀物会多到让你怀疑人生。

养细胞就像养孩子,血清就是奶粉。奶粉里偶尔有点没化开的结块,不代表奶粉有毒。别一看到沉淀就全盘否定一瓶血清的价值。搞清楚沉淀是怎么来的,用对方法处理,别让那些因为操作不当产生的蛋白层,成了你实验路上的绊脚石。下次再看到瓶底那层薄薄的东西,别慌,那是你上次解冻太心急留下的痕迹。



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